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技术成果

编号
355
类别 专利
项目名称
一种用于棒状杆菌基因组编辑的CRISPR系统
项目简介
本发明提供一种用于棒状杆菌基因组改造的工具。
在菌种选育过程中经常要对基因组进行遗传操作,但过去的实践表明,近两年发展起来的基因组编辑利器——CRISPR/Cas9系统用于谷氨酸棒状杆菌时的编辑效率非常低。针对于此,本发明提供了一种适用于棒状杆菌基因组编辑的 CRISPR/Cpf1 系统,研究结果表明,CRISPR/Cpf1基因组编辑有潜力改变棒状杆菌和其他CRISPR/Cas9无效的(Cas9-resistant)原核生物的基因组。本方法的优点是阳性率高,基因组改造周期短,将改造周期由传统方法的7天缩短为3天。
本发明的CRISPR/Cpf1系统能够精细地改变谷氨酸棒状杆菌基因组,效率达86-100%。由Cpf1、crRNA和同源臂组成的温敏质粒实现了谷氨酸棒状杆菌基因组中最大7.5-kb的缺失或1-kb的插入,最大效率分别为10%或13.3%。两个CRISPR/Cpf1辅助系统能够在3N+3或3N+1天内连续地进行N轮基因组编辑。
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项目和技术情况
基本信息
本发明公开了一种用于棒状杆菌基因组编辑的 CRISPR 系统,其包括:可表达 V 型CRISPR 核酸酶的 V 型 CRISPR 核酸酶表达元件,其包含启动子、V 型 CRISPR 核酸酶基因序列、终止子,所述 V 型 CRISPR 核酸酶选自 Cpf1、c2c1、c2c3;可表达 crRNA 的 crRNA表达元件,其包含启动子、crRNA 基因序列;所述 crRNA 是根据基因组上预期进行定向编辑的靶序列设计的碱基配对序列,所述 crRNA 用于将 V 型 CRISPR 核酸酶引导到基因组上的靶序列,靶序列包含 5’- TTN -3’等特征的 PAM 序列作为核酸酶识别位点,其中 N表示碱基 A、T、C 或 G。
该 CRISPR 系统可实现基因组的基因突变、基因框内插入或基因片段缺失。
成熟产品或解决方案
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是否申请专利,有哪些
专利申请目前实质审查中,尚未授权。
拟转让对象
微生物发酵、医药、食品、保健品、工业酶、化工领域的企业
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